编者按

 

2023年11月10日～14日，肝病学领域国际年度压轴大戏——美国肝病研究学会年会（AASLD2023）于美国波士顿隆重举行。据不完全统计，我国专家学者有200余篇摘要入选本届大会口头报告或壁报交流，成果丰硕，在此表示热烈祝贺！

 

我国北京大学鲁凤民教授团队此次有三项成果将在会上展示（1篇Oral和2篇Poster）。今天，我们先整理分享其中一篇于大会首日（10日）展示的Poster，提前一睹团队学术风采。这项研究发现：A1762T/ G1764A突变通过影响HBV转录组，可促使HBV复制（摘要编号：1514-C）。

 

 

全球范围内，慢性HBV感染仍然是一个重要的公共卫生问题。A1762T/G1764A突变是HBV基本核心启动子（BCP）中最常见的突变之一，与慢性HBV感染的“疾病”进展有关，然而，关于该突变对HBV复制的影响，仍然存在争议。鲁凤民教授研究团队系统地研究了A1762T/G1764A突变对HBV复制的影响，并探讨其潜在机制。

 

为了研究A1762T/G1764A突变对HBV病毒复制的影响，研究人员基于prcccDNA/pCMV-Cre重组质粒体系，构建了prcccDNA- a1762t /G1764A突变质粒，并转染至Huh-7或HepG2细胞，同时进行了流体动力注射。应用化学发光检测试剂盒定量测定HBsAg或HBeAg、qPCR、Western blot、Southern blot和Northern blot，评估A1762T/G1764A突变对HBV复制的影响。

 

应用5′- RACE分析和全长转录组测序，分析A1762T/G1764A突变对HBV转录物的影响。应用双荧光素酶报告基因法，检测A1762T/G1764A突变对P蛋白转录活性的影响。此外，通过ChIP-qPCR检测，探寻介导A1762T/G1764A突变促进病毒复制的转录因子。

 

结果，与野生型组相比，A1762T/G1764A突变在体外和体内均能促进HBV复制，抑制HBeAg产生。Southern Blot和Northern Blot也显示细胞内HBV rcDNA、复制中间体、dslDNA以及细胞内HBV 3.5 kb RNA水平显著升高。RT-qPCR和5′-RACE结果显示，A1762T/G1764A突变相对上调pgRNA的转录，而下调preC RNA的转录，这进一步证实了全长转录组测序结果。

 

不仅如此，A1762T/G1764A突变也上调了一部分具有表达HBV聚合酶潜力的sub-pgRNAs。进一步的ChIP-qPCR检测显示，A1762T/G1764A突变在BCP区产生了一个功能性的HNF1α结合位点，过表达HNF1α增强了A1762T/G1764A突变对HBV的影响。

 

上述研究表明，A1762T/G1764A突变可选择性调节preC RNA、pgRNA和sub-pgRNA转录，提示其可作为CHB患者治疗的指标，HNF1α可望作为治愈HBV感染患者的新靶点。

 

研究者说

 

A1762T/G1764A在慢乙肝患者体内的高频突变是一个很早就发现了的现象。在此研究中，借助先进的长测序技术，我们对A1762T/G1764A如何影响HBV转录进行了深入探索。我们证实，A1762T/G1764A不仅能选择性地增强pgRNA的转录，而且抑制preC mRNA的转录。

 

更为重要的是，我们首次发现A1762T/G1764A能提高sub-pgRNA的转录水平，为解读其如何增强HBV复制带来新的视角。进一步地，我们的研究揭示了A1762T/G1764A对HNF1α与HNF4α在BCP区域的结合特异性的影响，为深入理解HBV的相关机制并研发新的药物策略提供了新的方向。

 

▲此次会上展示的该项研究成果已正式发表在J Med Virol杂志

 

会场花絮

 

 

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