编者按

 

刚刚闭幕的肝病学领域国际年度压轴盛会——美国肝病研究学会年会（AASLD2023）上，我国北京大学鲁凤民教授团队有三项成果参与大会交流（1篇Oral和2篇Poster），聚焦慢性HBV感染相关机制，揭示慢性乙型肝炎（CHB）干扰素治疗优势人群，探索潜在治愈新靶点。《国际肝病》特邀鲁凤民教授解读研究发现及其对未来科学研究或临床实践的意义和启示，并展望我国CHB人群获得功能性治愈的前景。

 

研究一

TP53BP2高表达有利于聚乙二醇干扰素治疗CHB患者的功能性治愈

 

72: TP53BP2 IS ASSOCIATED WITH HBsAg CLEARANCE IN PEGINTERFERON-ALFA-TREATED CHRONIC HEPATITIS B

 

▲鲁凤民教授作口头报告

 

CHB患者应用干扰素治疗，有一小部分可发生HBsAg清除，达到功能性治愈的理想目标。确定对CHB治愈至关重要的宿主因素，有助于识别出可以从干扰素治疗中获益最大的患者。

 

该项研究总共纳入95例应用Peg-IFNα治疗的CHB患者，其中48例获得HBsAg清除，47例未获得HBsAg清除，对这些患者进行全基因组关联研究（GWAS），精准确定有助于HBsAg清除的宿主基因。然后，在207例患者中有81例获得HBsAg清除的另外一个患者队列中，对上述结果进行验证。通过对干扰素治疗患者的肝活检进行表达数量性状位点（eQTL）分析和RNA转录组测序分析，以及干扰素治疗的一系列体内和体外实验，对鉴定候选基因的功能参与进行验证。

 

结果，应用Peg-IFNα治疗CHB患者的单核苷酸多态性（SNP）rs7519753-C等位基因与血清HBsAg清除显著相关（P=4.85×10^-8，OR=14.47）。在验证队列中，也观察到这种关联，HBsAg清除组rs7519753-C基因型的频率显著较高（P=0.008312，OR=1.64）。对干扰素治疗患者肝活检的RNA转录组测序分析显示，HBsAg清除组的TP53BP2表达显著较高（P<0.05），携带rs7519753C等位基因人群的肝脏TP53BP2表达也是显著升高的（P=2.9×10^-6）。进一步的实验表明，在应用干扰素治疗的情况下，TP53BP2可增强干扰素刺激基因（ISGs）表达。从机制上，TP53BP2可以在转录后水平下调干扰素应答负性调控因子SOCS2的表达，从而增强由干扰素治疗激活的JAK/STAT信号通路的抗病毒活性。

 

上述研究表明，SNP rs7519753-C等位基因与应用Peg-IFNα治疗CHB患者的血清HBsAg清除率更高以及肝脏TP53BP2表达更高有关。TP53BP2可以通过抑制SOCS家族基因表达，增强肝细胞对干扰素的反应。因此，对于预测和增强CHB患者的干扰素治疗应答，TP53BP2具有关键作用。

 

研究者说

 

在目前仍然缺乏有效的CHB治愈药物的情况下，现有干扰素相比核苷（酸）类药物有更好的HBsAg转阴率，但具体到通过干扰素治疗追求治愈，还是需要对人群进行选择。除病毒因素外，宿主遗传背景也是影响治愈的一个重要因素。此外，治疗时机也非常重要，尤其是在缺乏可有效清除HBV DNA整合肝细胞的手段的情况下，及早启动抗病毒治疗应该是个选项，因为早治疗可减少整合发生，而整合肝细胞的增殖是肝硬化和肝癌发生的重要风险原因。

 

研究二

前C区突变通过增强病毒复制和核心蛋白异常表达，促进CHB的疾病进展

 

1518-C: PRECORE MUTATION PROMOTES CHRONIC HEPATITIS B DISEASE PROGRESSION VIA ENHANCED VIRAL REPLICATION AND ABERRANT CORE PROTEIN EXPRESSION

 

▲AASLD2023壁报展示

 

在慢性HBV感染患者中，普遍存在前C区突变（PC，G1896A）和基本核心启动子（BCP，A1762T/ G1764A）突变自然发生的情况，许多研究都集中在这些突变在病毒复制和疾病进展中的作用，但尚无明确结论。鲁凤民教授团队研究人员检索Pubmed、Embase和Cochrane图书馆，纳入2022年6月18日之前有关PC突变与HBV DNA、肝硬化或肝细胞癌相关的研究，应用转染或感染的细胞模型和动物模型，探讨单独PC突变或BCP+PC联合突变对病毒复制能力、传染性和致病性的影响。

 

结果，荟萃分析显示，在HBeAg阳性患者中，无G1896A突变患者的血清HBV DNA载量比PC突变患者高0.37 log₁₀ copies/mL（2.34倍变化），然而，在HBeAg阴性患者中，无G1896A突变患者的血清HBV DNA载量比PC突变患者低0.87 log₁₀ copies/mL（7.41倍变化）。此外，与匹配分层的无PC对照组相比，PC突变与肝硬化和肝细胞癌密切相关。

 

接下来，研究人员发现PC突变使preC RNA具有pgRNA样功能，可以表达核心蛋白和P蛋白，在转染的细胞和小鼠模型中，可以促进HBV复制。与单独的PC突变相比，BCP+PC突变可以使HBV DNA水平进一步升高。在HepG2-NTCP细胞和人肝嵌合小鼠中，PC和BCP+PC突变一致地降低了传染性，但增加了病毒DNA的复制能力。嵌合小鼠肝脏的RNA测序表明，BCP+PC突变抑制了人肝细胞中宿主IFN的信号通路，这可能是cccDNA水平升高的原因。重要的是，核心蛋白的积累可能通过内质网应激和TNF信号通路，导致严重的人肝细胞变性和细胞质空泡化，由BCP+PC组小鼠肝脏的细胞周期和hippo通路增强，表明这可能会转而引起肝细胞的代偿性增生。

 

由此可见，在体外和体内，PC和（或）BCP突变可以增强HBV的复制，但是，仅在HBeAg阴性患者中观察到PC突变与HBV DNA水平较高的关联。PC突变与慢性HBV感染患者的进展期肝病密切相关。BCP和PC联合突变可能通过增强病毒复制和核心蛋白的异常表达，引起人肝嵌合小鼠严重的肝细胞损伤。

 

研究者说

 

A1762T/G1764A在慢乙肝患者体内的高频突变是一个很早就发现了的现象。在此研究中，借助先进的长测序技术，我们对A1762T/G1764A如何影响HBV转录进行了深入探索。我们证实，A1762T/G1764A不仅能选择性地增强pgRNA的转录，而且抑制preC mRNA的转录。更为重要的是，我们首次发现A1762T/G1764A能提高sub-pgRNA的转录水平，为解读其如何增强HBV复制带来新的视角。进一步地，我们的研究揭示了A1762T/G1764A对HNF1α与HNF4α在BCP区域的结合特异性的影响，为深入理解HBV的相关机制并研发新的药物策略提供了新的方向。

 

另一篇poster详见AASLD中国之声丨鲁凤民教授：A1762T/ G1764A突变可促使HBV复制，HNF1α有望作为治愈新靶点

 

 

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